“水产生物病害与防治”专栏
为加强我国从事水产动物病害基础和应用研究的科研及技术人员的交流，促进我国水产动物病害研究和防治水平的提高，保障我国水产业的持续健康发展，本刊特开设“水产生物病害与防治”专栏，为广大水产科技工作者提供交流的平台。
题目
黑头软口鲦上皮瘤细胞ifn-1基因的表达及抗病*活性
作者
孙杰1，郭雅娜1，戴彩姣1，陈孝煊1，李莉娟1，袁*法1,2*
单位
1.华中农业大学水产学院，湖北武汉；
2.湖北省水生动物病害防控工程技术研究中心，湖北武汉
摘要
为了体外表达黑头软口鲦上皮瘤细胞(EPC)I型干扰素(IFN-1)，本实验通过RT-PCR从EPC中扩增ifn-1基因，构建重组表达质粒pET-32a-IFN-1，并转化到感受态细胞Transetta(DE3)，体外纯化后检测其抗病*活性。结果显示，ifn-1编码区大小为bp，编码个氨基酸，与草鱼干扰素1(CiIFN1)亲缘关系最近。通过SDS-PAGE分析，重组表达质粒pET-32a-IFN-1在宿主菌中可明显表达约35ku的融合蛋白条带，且部分呈可溶性表达，进而通过亲和纯化可溶性重组IFN-1(rIFN-1)，免疫新西兰大白兔获得效价较高的抗IFN-1多克隆抗体，可用于检测细胞内源性的IFN-1。定量PCR显示rIFN-1与EPC细胞孵育可以诱导抗病*蛋白Mx1的表达，并抑制鲤春病*血症病*(SVCV)引起的细胞病变(CPE)及SVCV的复制，表明rIFN-1具有抗病*活性。
关键词
黑头软口鲦；ifn-1；上皮瘤细胞；鲤春病*血症病*；原核表达
文中图片
ifn-1的扩增及重组质粒pET-32a-IFN-1双酶切鉴定
(a)M1.分子质量标准DL；1.ifn-1基因扩增。(b)M2.分子质量标准DL；2.重组质粒pET-32a-IFN-1双酶切鉴定(HindⅢ和BamHI)
IFN-1的系统进化树
GenBank登录号。草鱼：DQ(IFN1)，KU(IFN2)，KU(IFN3)，KU(IFN4)，FJ690(IFNγ1)，JX(IFNγ2)；斑马鱼：NM(IFN1)，NM(IFN2)，NM(IFN3)，NM(IFN4)，NM(IFNγ1)，NM(IFNγ2)；虹鳟：AM(IFN1)，NM(IFN2)，NM(IFN3)，NM(IFN4)，NM(IFN4)，NM(IFNγ1)，NM(IFNγ2)；金鱼：AY(IFN)，EU(IFNγ)
RT-qPCR检测ifn-1的转录水平
***.P0.；NC.正常对照组
SDS-PAGE分析pET-32a-IFN-1的表达及其重组融合蛋白的纯化
(a)SDS-PAGE分析pET-32a-IFN-1在37°C下的表达，M.预染标准分子量蛋白；1.不加入IPTG的空载对照组；2.加入IPTG的空载对照组；3.不加入IPTG的重组对照组；4~5.加入IPTG全菌蛋白实验组；6~7.实验组的上清液；8~9.实验组的沉淀.箭头(←)标识重组蛋白位置；(b)pET-32a-IFN-1融合蛋白的纯化，M.预染标准分子量蛋白；1.上清液纯化；2.穿流液纯化；3.包涵体纯化.箭头(→)标识纯化蛋白位置
Western-blot检测抗IFN融合蛋白血清抗体效价
Western-blot检测IFN-1抗体特异性
1.用polyI:C处理的FHM细胞；2.用polyI:C处理的EPC细胞；3.用0.1MOISVCV处理的EPC细胞；4.阴性对照(PBS处理的EPC细胞)，β-actin用作Western-Blot的内参
rIFN-1的抗病*活性
(a)RT-qPCR检测Mx1转录水平；(b)细胞病变分析；(c)RT-qPCR检测SVCV-G的复制水平；(d)rIFN-1预处理后病*滴度的测定
文章引用格式
孙杰，郭雅娜，戴彩姣，等.黑头软口鲦上皮瘤细胞ifn-1基因的表达及抗病*活性[J].水产学报.DOI:10./jfc..
SunJ,GuoYN,DaiCJ,etal.Expressionandantiviralactivityofifn-1geneinepitheliomapapulosumcyprinicellsofPimephalespromelas[J].JournalofFisheriesofChina.DOI:10./jfc..
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